柱后衍生法在豆豉腐乳等發(fā)酵食品中黃曲霉毒素檢測的應(yīng)用
針對豆豉、腐乳基質(zhì)可能存在難凈化、雜質(zhì)多的特點(diǎn),普瑞邦技術(shù)工程師根據(jù)《GB 5009.22-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族G族的測定》中半流體樣品實(shí)驗(yàn)方法及參考文獻(xiàn),進(jìn)行了免疫親和柱與多功能凈化柱-免疫親和柱雙柱凈化對比驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),具體實(shí)驗(yàn)過程如下:
【標(biāo)準(zhǔn)品】黃曲霉毒素混合標(biāo)準(zhǔn)工作液:1ug/mL
【樣品處理】
樣品 | 豆豉(a)腐乳(b) | |||
編號 | a1(b1) | a2(b2) | a3(b3) | a4(b4) |
處理過程 | 20mL70%甲醇水 | 20mL84%乙腈水 | ||
超聲波/渦旋振蕩器或搖床中振蕩 20min | ||||
超速離心10min,上清液備用 | ||||
取提取液4mL過M160固相凈化柱 | / | 取提取液4mL過M160固相凈化柱 | / | |
取2mL過柱后液體加18mL水稀釋 | 取提取液2mL加18mL水稀釋 | 取2mL過柱后液體加18mL水稀釋 | 取提取液2mL加18mL水稀釋 | |
全部過普瑞邦免疫親和柱,最終2mL甲醇定容上機(jī) | ||||
加標(biāo)水平 | 5mg/L |
液相譜圖如下:
b1:腐乳70%甲醇提取過多功能凈化柱-免疫親和柱雙柱凈化
b2:腐乳70%甲醇提取只過免疫親和柱凈化
b3:腐乳84%乙腈提取過多功能凈化柱-免疫親和柱雙柱凈化
b4:腐乳84%乙腈提取只過免疫親和柱凈化
a1:豆豉70%甲醇提取過多功能凈化柱-免疫親和柱雙柱凈化
a2:豆豉70%甲醇提取只過免疫親和柱凈化
a3:豆豉84%乙腈提取過多功能凈化柱-免疫親和柱雙柱凈化
a4:豆豉84%乙腈提取只過免疫親和柱凈化
【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】
通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,按照以上前處理流程,84%乙腈或70%甲醇提取后,過免疫親和柱就能達(dá)到凈化效果,但是70%甲醇提取腐乳、豆豉兩種基質(zhì)回收率偏低,建議實(shí)驗(yàn)過程為84%乙腈提取后過免疫親和柱凈化。
【液相條件】
流動相:甲醇:水 = 45:55
色譜柱:Pribolab真菌毒素檢測專用柱(C18,250×4.6 mm,5 μm)
流速:1.0 mL/min
進(jìn)樣量:10 μL
光化學(xué)柱后衍生器:Pribolab® KRC
激發(fā)波長:360 nm,發(fā)射波長:440 nm。